بهینه سازی انتقال ژن به ریشه های مویین گیاه شیرین بیان با استفاده از آگروباکتریوم ریزوژنز حامل ژن گزارشگر gus

thesis
abstract

شیرین بیان یکی از گیاهان دارویی مهم در جهان است. ریشه شیرین بیـان حاوی ساپونین تـری ترپن های فعـال می باشد. گلیسیریزین و محصولات هیدرولیز آن، اهمیت زیادی در صنعت دارویی و محصـولات غذایـی دارند. بسیـاری از گونـه هـای گیـاهی به آگرو باکتـریوم ریزوژنز حساس می باشند و تلقیح آنها با این باکتـری منجر به القـای ریشه های مویین می گردد. با استفاده از کشت ریشه های مویین، ممکن است میزان متابولیت های ثانویه افزایش یابد. تولید پروتئین های نوترکیب در ریشه های مویین و دستکاری ژنتیکی در مسیر متابولیـت های ثانویه برای افـزایش ماده موثره در این گیاه نیازمند بهینه سازی انتقال ژن می باشد. به این منظور ژن گزارشگر gus با استفاده از آگروباکتریوم ریزوژنز به گیاه شیرین بیان منتقل شد. برای بررسی میزان تراریختی و تولید ریشه های مویین در گیاه شیرین بیان، شش سویه باکتری آگروباکتریوم ریزوژنز شاملa4, ar15834 msu, d7, a7,و ar158مورد استفاده قرار گرفت. ریشه های مویین از ریزنمونه های برگی 21 روزه، 4-3 هفته پس از تلقیح با باکتری مشاهده شدند. بین سویه های مختلف از نظر میزان تراریختی در گیاه شیرین بیان اختلاف معنی داری وجود داشت. میانگین تولید ریشه های مویین(فراوانی تراریختی) توسط سویه ar15834 به میزان 42 درصد بود که بیشترین درصد تراریختی را نسبت به سایر سویه ها نشان داد. همچنین میزان رشد و اندازه ریشه های مویین تولید شده توسط سویه هـای ar15834 و d7 نسبت به سویه های دیگر بیشتر بود. همچنین برای اولین بار، گیاهچه هـای بذری 5-3 روزه که محور زیرلپه آن ها زخمی شده بود، برای تولید ریشه های مویین در گیاه شیرین بیان مورد استفاده قرار گرفتند. تولیـد ریشه ها در محل زخم درگیاهچه ها، 7-5 روز پس از تلقیح مشاهده شد و همه گیاهچه ها، ریشه مویین تولیـد نمـودند. گیاهچـه های بذری 5-3 روزه به عنوان مناسب ترین ریزنمونه برای تراریختی شیرین بیان با آگروباکتـریوم ریزوژنز معرفی شدند کـه از مزایـای آن سرعت رشد و فراوانی بـالای تراریختی است. ریشه های تراریخت در اثر هم کشتی گیاهچه-های بذری 5-3 روزه با باکتری ar15834 حامل پلاسمید pbi121 حاوی ژن های بتا گلوکورونیداز و مقاومت به کانامایسین به عنوان ژن گزارشگر و نشانگر انتخابی به دست آمدند. از غلظت 25 میلی گرم در لیتر کانامایسین برای گزینش گیاهان تراریخت استفاده شد. حضور و بیان ژن های انتقال یافته در گیاهان تراریخت توسط سنجش هیستوشیمیایی gus و واکنش pcr تایید شد. فراوانی تراریختی در حدود 90-80 درصد تعیین شد. همچنین پلاسمید pcambia3301 حاوی ژن گزارشگر gus اینترون دار از باکتری e.coli به سویه ar15834و d7 آگروباکتریوم ریزوژنز منتقل گردید و با روش بهینه شده، ریشه های مویین بیان کننده ژن gus اینترون دار بدست آمد. در این تحقیق تولید گیاهان کامپوزیت با استفاده از آگروباکتریوم ریزوژنز در گیاه شیرین بیان انجام شد که گیاهی با ریشه های مویین و اندام هوایی غیر تراریخت است. بیان ژن گزارشگر gus نیز در این گیاهان مشاهده شد.

First 15 pages

Signup for downloading 15 first pages

Already have an account?login

similar resources

بهینه سازی کشت بافت و انتقال ژن GUS به موسیر با استفاده از آگروباکتریوم

موسیر (Allium stipitatum) یک سبزی خوراکی بوده و از خصوصیات دارویی بسیار مهمی برخوردار است. بنابراین بهینه­سازی یک سیستم باززایی و تراریزش کارآمد در این گیاه جهت بهبود و اصلاح آن از طریق مهندسی ژنتیک ضروری است. دراین مطالعه، ریزنمونه­های جنین، طبق پیاز و ریشه درون شیشه­ای موسیر درمحیط کشت MS حاوی غلظت­های مختلفی از تنظیم کننده­های رشد NAA، 2,4-D و BA به­منظور القاء کالوس و باززایی کشت شدند. ریزن...

full text

بهینه‌سازی انتقال ژن به ارقام گلابی (Pyrus communis L.) با استفاده از ژن گزارشگر gus

Nowadays, genetic engineering methods are able to reduce the time of breeding programs for improvement of fruit trees, as well as offering a focused breeding system. The purpose of the present investigation was to study the factors that affect Agrobacterium tumefacience mediated transformation of two pear cultivars: Bartlett and Harrow Delight. Two explants (leaves and axillary shoot meristems)...

full text

بهینه سازی انتقال ژن به ارقام گلابی (pyrus communis l.) با استفاده از ژن گزارشگر gus

امروزه استفاده از روش های مهندسی ژنتیک توانسته است ضمن کوتاه کردن دوره طولانی اصلاح درختان میوه، این برنامه ها را هدفمندتر کند. منظور از اجرای این تحقیق، بهینه سازی و بررسی عوامل مؤثر بر انتقال ژن با استفاده از agrobacterium tumefacience به دو رقم گلابی بارتلت (bartlett) و هرو دیلایت (harrow delight) بود. در همین راستا، دو ریزنمونه برگی و مریستم جوانه جانبی با استفاده از اگروباکتریوم سویه eha10...

full text

تراریختی چغندر قند (Beta vulgaris L. ) با آگروباکتریوم ریزوژنز برای مطالعه بیان ژن در ریشه‌های مویین

در این تحقیق، با استفاده از آگروباکتریوم ریزوژنز، ریشه مویین چغندرقند تراریخته تولید گردید. در حین این مطالعه، تاثیر پروموتر جداسازی شده از آرابیدوپسیس تالیانا (پروموتر AT) که با پروموتر Hs1pro-1 ژن مقاومت به نماتد درچغندر مشابهت زیادی دارد، بر روی بیان ژن گزارشگر در مقایسه با پروموتر CaMV35S نیز مطالعه گردید. همچنین به عنوان کنترل منفی، ریشه‌های مویین با آگروباکتریوم ریزوژنز فاقد ناقل دوگا...

full text

بهینه سازی کشت بافت و انتقال ژن gus به موسیر با استفاده از آگروباکتریوم

موسیر (allium stipitatum) یک سبزی خوراکی بوده و از خصوصیات دارویی بسیار مهمی برخوردار است. بنابراین بهینه­سازی یک سیستم باززایی و تراریزش کارآمد در این گیاه جهت بهبود و اصلاح آن از طریق مهندسی ژنتیک ضروری است. دراین مطالعه، ریزنمونه­های جنین، طبق پیاز و ریشه درون شیشه­ای موسیر درمحیط کشت ms حاوی غلظت­های مختلفی از تنظیم کننده­های رشد naa، 2,4-d و ba به­منظور القاء کالوس و باززایی کشت شدند. ریزن...

full text

بهینه سازی باززایی و انتقال ژن به لیموترش (Citrusaurantifolia) به کمک اگروبا کتریم و ژن گزارشگر gus

لیموترش یکی از مهمترین و اقتصادی ترین محصولات باغی در جنوب ایران  و نسبت به بیماری هایی از جمله ویروس تریستیزای مرکبات (CTV)  جاروی جادوگر (WBDL) حساس است. بنابراین بهینه سازی یک سیستم باززایی و تراریزش کارآمد در این گیاه جهت بهبود و اصلاح آن از طریق مهندسی مهندسی ژنتیک ضروری است. به همین منظور بهینه سازی باززایی و تراریزش لیموترش با استفاده  از قطعات میانگره و قطعات اپی کوتیل سفید در دو محیط ک...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


document type: thesis

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه بوعلی سینا - دانشکده علوم کشاورزی

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023